RENDIMENTO DE CÉLULAS MESENQUIMAIS DO TECIDO ADIPOSO SUBMETIDAS A DIFERENTES PROTOCOLOS DE EXTRAÇÃO

Resumo

Objetivo: Estabelecer um protocolo de extração de células mesenquimais do tecido adiposo, a partir da avaliação do rendimento celular em dois métodos de digestão enzimática do tecido. Material e Métodos: Fragmentos de tecido adiposo foram extraídos da região inguinal de camundongos e processados por dois protocolos distintos: Grupo 1 – digestão enzimática com colagenase I; Grupo 2 – digestão enzimática com colagenase I e tripsina/EDTA, ambos por 1 hora a 37°C. No terceiro subcultivo (P3) as células dos dois grupos foram submetidas a contagem em Câmara de Neubauer para avaliação da proliferação celular e obtenção da curva de crescimento nos intervalos de 24, 48 e 72 horas. Foi realizada a marcação pelo DAPI no intervalo de 72 horas, nos grupos estudados, para avaliar a existência de danos morfológicos nucleares. Os dados foram analisados estatisticamente, com nível de significância de 5%. Resultados: Os dois grupos exibiram um padrão de crescimento celular ascendente. As médias das contagens celulares demonstraram uma maior proliferação celular no grupo I, com diferença estatisticamente significante entre os grupos nos intervalos de 48 e 72 horas (p<0,05). Alterações morfológicas nucleares não foram observadas nos grupos. Conclusão: A digestão enzimática do tecido adiposo por colagenase I, sem associação com a tripsina, proporcionou melhor rendimento das células mesenquimais, o que favorece a escolha desse protocolo em experimentos com este tipo celular. DESCRITORES: Tecido Adiposo. Técnicas de Cultura de Células. Proliferação Celular.